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質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印在免疫印跡的過程中會導(dǎo)致要么比較弱的信號要么沒有信號.盡管質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印時有發(fā)生，科學(xué)家們通常不把它作為一個免疫印跡實(shí)驗(yàn)失敗的原因。因此，當(dāng)需要排除質(zhì)量差的信號的原因時轉(zhuǎn)膜的質(zhì)量好壞需要首先被考慮.導(dǎo)致轉(zhuǎn)膜差的原因質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印可能發(fā)生在抗原水平低的情況下。這種情況的發(fā)生通常是因...

當(dāng)?shù)孜锇l(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生的能量以光的形式釋放出來的時候，我們稱這個過程為化學(xué)發(fā)光。魯米諾（luminol）是常用的化學(xué)發(fā)光試劑之一，被過氧化物氧化后它會產(chǎn)生一種激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物——aminophthalate。這種產(chǎn)物衰變至低能態(tài)的同時釋放出光子。添加物可以提高魯米諾反應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度和持續(xù)時間以及靈敏度。...

用層析法，電泳法，免疫化學(xué)的方法對蛋白樣本進(jìn)行分離或分析前通常需要先進(jìn)行蛋白定量。用比色法進(jìn)行蛋白定量分析的試劑通常分為兩類：一類是間接檢測法，即檢測與蛋白螯合后被還原銅離子；另一類是直接檢測法，即使用與蛋白結(jié)合的染料，檢測樣品中顏色的變化。所有的檢測方法都要適用于應(yīng)用的適用性。每種檢測方法都有它的...

蛋白樣品制備中，在細(xì)胞破碎之后，既可以利用特定蛋白質(zhì)的特性來分離某一類蛋白質(zhì)，比如親和純化，比如前面介紹的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一個考慮方向是去除雜質(zhì)----去掉樣品中某些非目標(biāo)高豐度蛋白或者雜質(zhì)的干擾，同樣可以達(dá)到簡化樣本的目的。當(dāng)然要小心“倒洗腳水的時候別把嬰兒也倒掉了”，一定要選...

蛋白質(zhì)是成分高度復(fù)雜的，復(fù)雜的生物大分子包括1個或多個長鏈氨基酸.蛋白或肽折疊形成二級和三級結(jié)構(gòu)，和其他蛋白亞基相互作用來形成四級結(jié)構(gòu)。蛋白是在結(jié)構(gòu)上彼此不同的同時出于穩(wěn)定性和活性的目的要求不同的周邊環(huán)境.蛋白當(dāng)脫離他們天然的環(huán)境后是非常容易降解，變性和沉淀的。在蛋白抽提過程中，細(xì)胞和細(xì)胞器膜是被破...

當(dāng)細(xì)胞破碎的時候，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響最終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時應(yīng)當(dāng)使...